NK-92MI細胞，人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞

產品名稱：NK-92MI

細胞形態：

組織來源：淋巴母細胞

傳代情況：P4-5代T25細胞培養瓶

細胞數量：1~3*10⁶細胞/25cm2培養瓶

培養條件：MEMα-培養基(GIBCO,貨號12000022，添加NaHCO3 1.5g/L，肌醇 43.2mg/L, 葉酸 8.82mg/L,100-200單位/ml重組 IL-2,β-巰基乙醇 7.8mg/L)，90%；優質胎牛血清

生長條件： 95%空氣+5%二氧化碳 37攝氏度

生長狀態：懸浮生長

存儲條件：50% 完培+40%FBS+10%DMSO 液氮

NK-92是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細胞衍生來的一株白細胞介素-2依賴型NK細胞株。 這株細胞對很多惡性細胞有細胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562和Daudi細胞。 NK-92細胞(經過照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細胞的功能。 NK-92細胞有以下特征： CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面標記陽性，CD56亮；CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34和HLA-DR表面標記陰性。

NK-92MI細胞，人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞

對于貼壁細胞，若細胞漂浮：培養瓶不開封，用75%酒精擦拭后平躺置于培養箱內。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，換成新鮮的培養基；如細胞還不貼壁，將細胞離心收集移到新的培養瓶中，原培養瓶加部分新鮮培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。對于懸浮細胞：收到細胞后，將細胞全部離心，去掉舊的培養基，換成新鮮的培養基繼續培養。

特別注意：（如使用公共實驗室或者初次接觸，建議添加雙抗培養）

（1）貼壁細胞收到當天有少量或沒有飄忽的細胞可以當天換液，因為路途顛簸造成大量飄忽的情況時，請將細胞換液后放置培養箱孵育到第二天再做消化傳代，請優先選擇直徑6cm的培養皿進行傳代培養

（2）收到細胞后請盡快更換為含10%血清的新鮮培養基，如因特殊情況需要繼續使用原瓶，請在原瓶培養基中額外添加10%的血清，（原瓶培養基的繼續使用時間最長不宜超過72小時）

（3）如簽收時出現培養瓶壁破裂，漏液等情況請及時做好照片記錄并聯系SUER技術人員

細胞接收后的操作流程與注意事項：

1）貼壁細胞生長緩慢；適當提高血清濃度（最高不能超過20%），或可根據該細胞生長特性生長密度，考慮胰酶消化后，轉移到新的培養瓶繼續培養

2）如果細胞為貼壁細胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態，請將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養基到新的培養皿/瓶繼續培養3天；同時原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養基培養3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現增值而是繼續脫落死亡，請及時聯系實驗室技術人員會跟進解決

3）生長不均：貼壁細胞若出現分布不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重懸打散細胞，加入新鮮培養基進行培養

細胞常規培養傳代流程（請嚴格遵照無菌操作）

（1）吸出原培養瓶中的培養基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2-3ml 0.25%胰酶進行消化細胞（注意把握消化時間，通常控制在1-2min）

（2）注意培養基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存

（3）取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中，添加適當的*培養基，把細胞懸液打勻，于培養箱中培養

（4）鏡下觀察消化情況，在HS505.T人淋巴結成纖維樣細胞生長特性邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂浮）去掉胰酶，加6-8ml*培養基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散。