C33A人宮頸癌細胞

【細胞縮寫】    C-33A細胞

    【細胞名稱】    C-33A(人子宮頸癌細胞)

    【背景資料】    C-33A細胞株是N.Auersperg從宮頸癌切片中建立的一系列細胞株中的一株，源于宮頸癌活檢標本。細胞一開始就表現出亞二倍體核型及上皮細胞形態。連續傳代可以觀察到核型不穩定。存在成視網膜細胞瘤蛋白(pRB)，但大小不正常。P53表達上調，且有一個273位密碼子的點突變導致Arg->Cys的替換。人乳頭瘤病毒DNA及RNA陰性。

    【細胞消化時注意把握消化時間，消化不夠會導致吹打細胞時造成損傷，一般消化時間是2-3分鐘，但以鏡檢時大部分細胞縮回球形為準，一般2次即可將細胞吹打下來，消化不夠進行細胞吹打易損傷細胞。細胞系的凍存液配方：90%FBS+10%DMSO，貼壁細胞若出現分布不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重懸打散細胞，加入新鮮培養基進行培養】    細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國內外著名大學建系

    【代次】    P4

    【規格】    復蘇T25培養瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管（兩支）

    【細胞數】    1*10（6）

    【生物安全級別】    1

    【生物體】    人

    【組織來源】    子宮

    【細胞形態】    上皮細胞樣

    【細胞特性】    貼壁

    【特別注意：如使用公共實驗室或者初次接觸細胞培養，細胞系建議添加雙抗培養，貼壁細胞收到當天切忌立刻消化，請將細胞換液后放置培養箱孵育到第二天再做消化傳代，請優先選擇直徑6cm的培養皿進行傳代培養，如果細胞為貼壁細胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態，請將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養基到新的培養皿/瓶繼續培養3天；同時原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養基培養3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現增值而是繼續脫落死亡，請及時聯系實驗室技術人員會跟進解決】    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

   細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌

    【培養條件】    詳見細胞說明書

    【傳代方法】    建議1:2-1:3 兩天換液一次

    【凍存條件】    詳見細胞說明書

    【主要文獻】    請具體查閱相關發表文章

C33A人宮頸癌細胞

1)培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決；2)細胞漂浮：培養瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以離心去掉，留10ml培養液培養觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決；3)對于生長緩慢的貼壁細胞：可采用適當的提高培養基中血清濃度，或隔日換液的方法來保證細胞的狀態和生長速度；4)對于生長不均的貼壁細胞：在培養過程中若出現細胞分布明顯不均時(即某一區域細胞已重疊生長，而旁邊則為一塊空白)，此時可將細胞進行消化，重新打散，貼壁，加入新培養基進行培養。
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
細胞傳代注意事項：①傳代培養時注意無菌操作并防止細胞間的交叉污染。所有操作盡量靠近酒精燈火焰。每次進行一種細胞的操作。每種細胞使用一套器材；②每天觀察細胞形態，掌握好細胞是否健康的標準：健康細胞的形態飽滿，折光性好，生長致密時即可傳代；③如發現細胞有污染跡象，應立即采取措施，一般應棄置污染的細胞，如果必須挽救，可加含有抗生素的BBS或培養基反復清洗，隨后培養基中加入較大量的抗生素，并經常更換培養基。傳代細胞的建系和維持：細胞系的維持通過換液傳代再換液、再傳代和細胞種子凍存來實現。對每一個細胞系來說都有其自身的特點，要做好建系的維持必須記錄好細胞檔案,換液傳代和做好細胞系的管理工作。培養細胞的凍存及復蘇：細胞低溫凍存是培養室常規工作和通用技術。細胞凍存在-196℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。
細胞產品包裝：復蘇形式：T25培養瓶(一瓶)或凍存形式：1ml凍存管(兩支)
細胞形態特性：詳見細胞說明書
細胞凍存的步驟：1)選擇處于對數生長期的細胞，在凍存前一天換液。將多個培養瓶中的細胞培養液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養液。用吸管吸取培養液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min，10分鐘)；2)去上清液，加入含20%小牛血清的*培養基，于4℃預冷15分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為5×106～1×107/mL之間。(凍存培養液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具體要看培養的細胞類型來選擇；3)將分裝上述細胞懸液于2ml凍存管中，每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊，并標記好細胞名稱和凍存日期，同時作好登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數)；4)將裝好細胞的凍存管放到凍存盒中，-80℃冰箱過夜。；如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜，放入液氮罐);或者可以在4℃，2h;然后轉到-20℃，2h;-80℃，2h;放入液氮罐；5)細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，取出一只凍存管細胞復蘇培養，觀察生長情況，然后再繼續凍存。