PC3人胰腺癌細胞

細胞特性

1)來源：胰腺癌

2)形態：上皮細胞樣，貼壁生長

3)含量：>lxl06 個/mL

4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝

運輸和保存：使用T25瓶充液發送活細胞。收到細胞后，請先在顯微鏡下檢查細 胞生長狀態，并將T25瓶置于培養箱約6h或過夜后，再次檢查細胞狀態。若狀 態良好，可進行細胞后續處理操作，按照以下方式進行。若發現可疑污染物，請 及時與我們取得聯系。

細胞用途：僅供科研使用。

PC3人胰腺癌細胞

細胞培養步驟

1)培養基及培養凍存條件準備：

1.準備F-12K培養基（F-12K : GIBCO,貨號：21127-022);北美胎牛血清，10%; PS 1%。

2.培養條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱 濕度為70%-80%。

3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

2)細胞處理：

1. 復蘇細胞：將含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加 入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補 加l-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將 細胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢 查細胞密度。

2.細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中，置于37°C培

養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部 分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止 消化。

按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分 鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養液后吹勻。

將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者 瓶中。

3.細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。

下面T25瓶為例；

細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶，細 胞變圓脫落后，加入2ml*培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為 10%。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數量分配到凍存管中，注意凍存 管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。

將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液 氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項：

收到細胞后，若發現干冰己揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染， 請立即與我們聯系。

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作， 并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。