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細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理?
一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。
如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒(méi)有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：
(1)細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)老，破碎的細(xì)胞殘骸;
(2)血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果;
(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長(zhǎng);
(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格。可應(yīng)用離心、過(guò)濾的方法去除這些黑點(diǎn);
(5)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。
細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點(diǎn)生成?
(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
(2) 培養(yǎng)基無(wú)需37℃水浴。
(3) 培養(yǎng)基保持PH值7.0- 7.2。
(4) 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。
(5) 掌握細(xì)胞傳代的好時(shí)機(jī)，細(xì)胞切勿生長(zhǎng)過(guò)老。
小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項(xiàng)?
血清保存和使用須注意：血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超過(guò)一個(gè)月。解凍血清時(shí) ，應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱，并經(jīng)常搖勻使之溶解，然后至室溫放置使之升溫，不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中，如放在37℃解凍，顏色加深，粘稠度也會(huì)增加，血清在解凍和熱滅活后，應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
胎牛血清，小牛血清和新生牛血清三種之間的區(qū)別：
這三種血清的成份，總體沒(méi)有什么明顯差別，只是有一些成分與其生存環(huán)境有關(guān)，如上述有人說(shuō)的抗體等很少。此外，因生長(zhǎng)發(fā)育的需要，有些成分在小牛出生后會(huì)發(fā)生一些變化。不過(guò)還沒(méi)有搞清楚它與其它的血清之間的差別。有一點(diǎn)可以肯定，胎牛血清中的部分功能蛋白與小牛血清中的含量有差別。
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