CBRH7919大鼠肝癌細胞

目的體外觀察大鼠CBRH-7919肝癌細胞誘導大鼠骨髓間充質干細胞(BMSC)向血管內皮細胞分化及其機制。方法分離Wistar大鼠骨髓間充質干細胞,鑒定后構建BMSC與肝癌細胞的共培養模型,分3組:共培養組、單獨BMSC組及含有抗VEGF抗體的共培養組,48 h和72 h后,免疫熒光法檢測VEGFR2和CD31的表達,半固體培養基檢測毛細血管樣結構的形成。結果 BMSC表型鑒定為CD29+/CD44+/CD45-/CD34-,48 h后,共培養組BMSC少量表達CD31和VEGFR2,陽性率分別為(11.50±1.87)%和(12.33±1.37)%,且出現毛細血管樣結構(8.00±0.05),72 h后,共培養組CD31和VEGFR2表達明顯增多,陽性率分別為(24.43±2.23)%和(24.86±0.69)%,毛細血管樣結構也明顯增加(22.00±0.02),而單獨BMSC組和含有抗VEGF抗體的共培養組均陰性。結論血管內皮生長因子(VEGF)在大鼠CBRH-7919肝癌細胞誘導大鼠骨髓間充質干細胞分化成血管內皮細胞過程中起了關鍵作用。

CBRH7919大鼠肝癌細胞

1)培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決；2)細胞漂浮：培養瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以離心去掉，留10ml培養液培養觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決；3)對于生長緩慢的貼壁細胞：可采用適當的提高培養基中血清濃度，或隔日換液的方法來保證細胞的狀態和生長速度；4)對于生長不均的貼壁細胞：在培養過程中若出現細胞分布明顯不均時(即某一區域細胞已重疊生長，而旁邊則為一塊空白)，此時可將細胞進行消化，重新打散，貼壁，加入新培養基進行培養。
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
細胞傳代方法：1：2-1：3傳代；每周換液2-3次。
細胞傳代注意事項：①傳代培養時注意無菌操作并防止細胞間的交叉污染。所有操作盡量靠近酒精燈火焰。每次進行一種細胞的操作。每種細胞使用一套器材；②每天觀察細胞形態，掌握好細胞是否健康的標準：健康細胞的形態飽滿，折光性好，生長致密時即可傳代；③如發現細胞有污染跡象，應立即采取措施，一般應棄置污染的細胞，如果必須挽救，可加含有抗生素的BBS或培養基反復清洗，隨后培養基中加入較大量的抗生素，并經常更換培養基。傳代細胞的建系和維持：細胞系的維持通過換液傳代再換液、再傳代和細胞種子凍存來實現。對每一個細胞系來說都有其自身的特點，要做好建系的維持必須記錄好細胞檔案,換液傳代和做好細胞系的管理工作。培養細胞的凍存及復蘇：細胞低溫凍存是培養室常規工作和通用技術。細胞凍存在-196℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。

細胞凍存的步驟：1)選擇處于對數生長期的細胞，在凍存前一天換液。將多個培養瓶中的細胞培養液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養液。用吸管吸取培養液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min，10分鐘)；2)去上清液，加入含20%小牛血清的*培養基，于4℃預冷15分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為5×106～1×107/mL之間。(凍存培養液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具體要看培養的細胞類型來選擇；3)將分裝上述細胞懸液于2ml凍存管中，每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊，并標記好細胞名稱和凍存日期，同時作好登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數)；4)將裝好細胞的凍存管放到凍存盒中，-80℃冰箱過夜。；如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜，放入液氮罐);或者可以在4℃，2h;然后轉到-20℃，2h;-80℃，2h;放入液氮罐；5)細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，取出一只凍存管細胞復蘇培養，觀察生長情況，然后再繼續凍存。